产品货号:
LA11075
中文名称:
Taq Plus DNA聚合酶
英文名称:
Taq Plus DNA Polymerase
产品规格:
250U|1000U|3*1000U
发货周期:
1~3天
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Taq Plus DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3'→5'外切酶活性(校对活性)的蛋白组成的混合酶,保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。对于长度在5kb以内的目的片段,与Taq DNAPolymerase相比,Taq Plus DNA Polymerase具有更强的扩增性能。一般情况下,使用Taq Plus DNAPolymerase可以得到更高的产量。有些Taq DNA Polymerase不能扩增的片段,Taq Plus DNAPolymerase可以正常扩增。可用于10kb以内以基因组为模板的PCR扩增以及15kb以内以质粒和λDNA为模板的PCR扩增。PCR产物的3'端带A,可直接克隆至T载体。
本产品广泛适用于常规PCR。
用活化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃ 30min内,掺入10nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个单位。
经检测无外源核酸酶活性,PCR检测无宿主残余DNA,能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。
组分 | 250U | 1000U | 3×1000U |
Taq Plus DNA聚合酶(5U/μL) | 50μL | 200μL | 3×200μL |
10×Taq Plus Buffer (with Mg2+) | 1mL | 4×1mL | 12×1mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,有效期2年。
- 操作注意事项
由于Taq Plus DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性,PCR反应体系请在冰上进行配制,之后再置于PCR仪上进行反应。这样可以减少在反应准备阶段发生的非特异扩增,有助于得到高特异性的扩增结果。 - 引物设计要点
- 引物3’端最后一个碱基最好为G或者C;
- 引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配;
- 引物3’端应避免出现发夹结构;
- 正向引物和反向引物的Tm值相差不超过1℃为佳,Tm值调整至55~65℃为佳(引物Tm值推荐使用Primer Premier 5进行计算);
- 引物额外附加序列,即与模板非配对序列,不应参与引物Tm值计算;
- 引物的GC含量控制在40~60%之间;
- 引物A、G、C、T整体分布要尽量均匀,避免使用GC或者AT含量高的区域;
- 避开引物内部或者两条引物之间有5个碱基以上的互补序列,两条引物的3’端避免3个碱基以上的互补序列;
- 引物设计完毕请使用NCBI BLAST功能检索引物特异性,以避免非特异性扩增产生。
- 引物3’端最后一个碱基最好为G或者C;
- PCR反应体系
成分 用量 ddH2O 至50μL 10×Taq Plus Buffer (with Mg2+) 5μL dNTP Mix (10mM each) 1μL 模板DNA optional 引物1(10μM) 2μL 引物2(10μM) 2μL Taq Plus DNA Polymerase (5U/μL) 0.5~1μL
注:- Mg2+终浓度:本品已含有2mM Mg2+,如有需要,可适当调整Mg2+浓度至2~4mM。
- 聚合酶添加:室温下聚合酶有一定程度的5’-3’聚合酶活性,为了防止非特异性扩增,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
- 聚合酶量:推荐使用0.5μL。可以在0.25~1μL之间进行优化。
- 不同模板的推荐使用量(50μL反应体系):
模板种类 扩增片段 基因组DNA 100ng~1μg 质粒DNA 10pg~20ng cDNA 1~5μL(不超过反应体系的1/10)
- Mg2+终浓度:本品已含有2mM Mg2+,如有需要,可适当调整Mg2+浓度至2~4mM。
- PCR扩增程序
循环步骤 温度 时间 循环数 预变性 94℃ 30sec~3min 1 变性 94℃ 20~30sec 30-35 退火 50~60℃ 30sec 延伸 72℃ 1kb/min 终延伸 72℃ 5~10min 1
注:- 预变性温度和时间:推荐使用94℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30sec;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3min。
- 退火温度和时间:推荐使用50~60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20sec,可以在10~30sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
- 扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止DNA发生降解。
- 预变性温度和时间:推荐使用94℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30sec;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3min。
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